技術背景
膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環化合物（polycyclic compound）。其分子式為 cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動物組織中，主要以非脂化形式存在于細胞膜中。在膜功能和脂代謝以及**合成中起著重要作用。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構體的多烯***（polyene antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱。源自于 S. FILIPINENSIS **的培養液中。其分子式為 C35H58O11，分子量為 654.8。首先在膽固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化膽固醇（cholesterel ester）轉化為游離膽固醇，然后使用菲律賓與所有游離膽固醇結合形成聚集體或復合物，產生熒光。
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產品內容 |
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清理液（Reagent A） |
40 毫升 |
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固著液（Reagent B） |
4 毫升 |
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水解液（Reagent C） |
4 毫升 |
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抗干擾液（Reagent D） |
4 毫升 |
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染色液（Reagent E） |
2 毫升 |
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產品說明書 |
1 份 |
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保存方式 |
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保存水解液（Reagent C）和 染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，避免光照； 其余的保存在 4℃冰箱里；有效保證 6 月
用戶自備
熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析
實驗步驟
一、 樣本固著處理
- 準備 1 個 48 孔細胞培養板的細胞或載波片的細胞
- 小心抽去 48 孔細胞培養板里的培養液
- 小心加入 200 微升 清理液（Reagent A），鋪滿整個樣品表面
4. 小心移去 清理液（Reagent A）
- 重復實驗步驟 3 至 4 二次
- 小心加入 200 微升 固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
- 室溫下孵育 30 分鐘
8. 小心移去 固著液（Reagent B）
- 小心加入 200 微升 清理液（Reagent A），清洗樣品表面
10. 小心移去清理液（Reagent A）
- 重復實驗步驟 9 至 10 二次二、樣本染色處理
- 小心加入 200 微升 水解液（Reagent C），鋪滿整個樣品表面
- 室溫下孵育 1 小時（注意：可以延長至 4 小時，避免干枯）
3. 小心移去水解液（Reagent C）
- 小心加入 200 微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
5. 小心移去清理液（Reagent A）
- 重復實驗步驟 4 至 5 一次
- 小心加入 200 微升抗干擾液（Reagent D），鋪滿整個樣品表面
- 室溫下孵育 10 分鐘
9. 小心移去抗干擾液（Reagent D）
- 小心加入 100 微升染色液（Reagent E），鋪滿整個樣品表面
- 室溫下孵育 30 分鐘，避免光照
12. 小心移去染色液（Reagent E）
- 小心加入 200 微升 清理液（Reagent A），清洗樣品表面
14. 小心移去清理液（Reagent A）
- 重復實驗步驟 13 至 14 二次
- 小心加入 100 微升清理液（Reagent A）
- 即刻在熒光顯微鏡下觀察：激發波長：340nm；散發波長：430nm――膽固醇陽性呈現藍色熒光
注意事項
- 本產品為 20 次（48 孔細胞培養板）操作
- 操作時，須戴手套
- 操作時，避免污染母液
- 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面